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Harris 分析化學中文版 10e
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    • 彩色插圖 32 超臨界二氧化碳流體
    • 彩色插圖 33 流體動力學液流和電滲流等兩者的速度分佈圖
    • 彩色插圖 34 使用螢光偵測法之毛細管篩分電泳法的DNA定序
    • 彩色插圖 35 膠質與透析
    • 彩色插圖 36 濁點萃取法
  • 第2章 實驗室工具
    • 以石英水晶微量天平測量添加到 DNA 的一個鹼基
    • 2-1 化學藥品與廢棄物的安全性和處置倫理
    • 2-2 實驗室筆記本
    • 2-3 分析天平
    • 2-4 滴定管
    • 2-5 容積量瓶
    • 2-6 吸量管和注射針
    • 2-7 過濾
    • 2-8 乾燥
    • 2-9 容積玻璃器皿的校正
    • 摘要
    • 練習
    • 問題
      • 安全規範和實驗室筆記本
      • 分析天平
      • 玻璃器皿和熱膨脹現象
    • 參考操作流程:校正 50 mL 滴定管
      • 範例 滴定管校正
  • 第8章 活性和化學平衡的系統性處理方法
    • 水合離子
    • 8-1 離子強度對鹽類之溶解度的影響性
    • 8-2 活性係數
    • 8-3 回顧 pH 值
    • 8-4 平衡狀態的系統性處理方法
    • 摘要
    • 練習
    • 問題
  • 第 13 章 化學平衡的深入研究項目
    • 13-1 酸鹼系統的通用方法
    • 13-2 活性係數
    • 13-3 溶解度受 pH 值的影響性
    • 13-4 以差異圖分析酸鹼滴定
    • 摘要
    • 練習
    • 問題
  • 章末習題&練習解答
  • 分析化學_附錄A 對數、指數和直線圖形
  • 分析化學_附錄B 不確定度之累積
  • 分析化學_附錄C 額外之數據處理技術
  • 分析化學_附錄D 氧化價數和平衡氧化還原反應式
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  • 連續稀釋過程
  • 微量吸量管
  • 注射針

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  1. 第2章 實驗室工具

2-6 吸量管和注射針

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吸量管 (pipet) 能排放出已知體積量的液體。在圖 2-11a 顯 示出的移液吸量管被校正成可以排放出固定體積量液體。不需要排出吸量管內的最後一滴液體,也不應該吹出這一滴液體。

不要將移液吸量管的最後一滴液體吹出來。

對於圖 2-11b 中的測量吸量管,可以採用滴定管校正方法來校正之。可以使用測量吸量管排放各種體積量,譬如 5.6 mL,而從 1.0 mL 刻度開始排放液體,直到液體高度達到 6.6 mL 刻度才終止。移液吸量管會更為準確,其容許量就表列在表 2-4 中。移液吸量管越大時,它的相對不確定度會越小。1 mL 吸量管的相對不確定度為 (0.006/1) × 100 = 0.6%。而 25 mL 吸量管的相對不確定度為 (0.03/25)×100 = 0.15%。 當使用第 2-9 節所描述的校正方法來測量個別吸量管裡實際含有的體積量,也能降低不確定度。

使用移液吸量管

使用橡膠球,而不是用嘴巴 ,將液體吸入吸量管內,直到稍微高於校正刻度處。(要避免將液體吸入橡膠球內!如果液體被吸入橡膠球內,要使用新的溶液和新的橡膠球,重新開始吸取液體 的過程。) 可以先排放掉兩份吸量管體積量的液體,以沖洗掉先前殘留的試劑。當吸取第三份體積量液體超過校正刻度之後,要迅速用食指取代橡膠球按在吸量管尾端。當移除橡膠球,而要讓食指達到定位時,可以將吸量管尖端輕壓在容器底部,而減緩液體往下流出的現象。要準備開始排放液體之前,要用乾淨擦拭紙擦掉吸量管外壁上的多餘液體。

當吸量管移到接收容器後,將吸量管尖端靠著容器內壁,再利用重力讓液體排出。就如圖 2-10a 所顯示的,當尖端接觸內壁排放液體,而當液面到達校正刻度時,在尖端處就不會有液滴懸掛著。當液體停止流下後,將吸量管尖端靠著內壁數秒,以達到完全排放的結果。絕不可以吹出最後一滴液體 。在快完成排放過程時要讓吸量管維持垂直狀態。當使用吸量管完成移液操作後, 要用蒸餾水沖洗吸量管,或浸泡著吸量管直到準備要清潔吸量管為止。絕不可以讓溶液在吸量管內部乾燥,因為乾燥的內部沉積物是很難除去的。

吸量管中排放出液體等三種功能的三個閥門。要學習使用任何一 種吸球,而以吸量管吸取或排放液體。

連續稀釋過程

連續稀釋過程 (serial dilution) 是進行持續稀釋過程以獲得所需要濃度值之試劑溶液的一種過程。其目的是能夠準確地轉移少量物質,而不會因為數量太少以致於無法準確秤量之。以下範例是能夠用來製備出儀器分析所需要之標準品的一種過程。

範例 連續稀釋過程

要製備出含有 2.00 μg Cs/mL (實際上是 Cs+) 溶液來作為原子放射分析法的標準品 (1 μg = 1 微克 = 10– 6 g)。此時有 250、500, 和 1 000 mL 等各種容積量瓶,和 5、10,和 25 mL 等各式移液吸量管。為了獲得 4 個位數的秤量準確度,希望使用能夠準確 到毫克小數位的天平來秤量至少 1 g 的純 CsCl。請設計出一個流程,而使用純 CsCl 來製備出濃的母溶液,並進行一系列稀釋過程以獲得 2.00 μg Cs/mL 的溶液。

解

為了進行 50 倍的稀釋過程,要使用 10 mL 移液吸量管轉移 10.00 mL 母溶液到 500 mL 體積量瓶中,再稀釋至該體積量。可以將這份稀釋溶液稱為 B 溶液。它的濃度值是 (1 000 μg Cs/mL)/ 50 = 20.0 μg Cs/mL。接著將 B 溶液進行 10 倍的稀釋過程,可以使用 25 mL 移液吸量管轉移 25.00 mL B 溶液到 250 mL 體積量瓶中,再稀釋至該體積量。最後的這份溶液具有所需要的 2.00 μg Cs/mL 濃度值。在第 3 章中,將會探討如何使用每一測量過程中的不確定度,來決定出最後濃度值的有效數字位數。

也可以使用其他的許多種方式來達到相同的稀釋結果。譬 如,將 5.00 mL 溶液轉移到 250 mL 體積量瓶來進行一次的 50 倍稀釋過程。

自我測試

要如何將含有 20.0 μg Cs/mL 的 B 溶液分別稀釋成含有 4、3,與 1 μg Cs/mL 的三種新溶液?

答案

對於 1 μg/mL 溶液而言,可以將 25 mL B 溶液稀釋成 500 mL 溶液。而對於 3 μg/mL 溶液而言,可以將 (25 + 25 + 25) mL B 溶液稀釋成 500 mL 溶液。關於 4 μg/mL 溶液,則是將 (25 + 25) mL B 溶液稀釋成 250 mL 溶液。

氣溶膠 (aerosol) 是細微液 或固體顆粒懸浮在氣體中。

在連續稀釋過程中,可以使用更大體積量的吸量管和量瓶, 來改善相對不確定度。如果可以選擇要將 1 mL 溶液轉移到 100 mL 體積量瓶中,或者將 10 mL 溶液轉移到 1 L 體積量瓶中時, 則使用更大體積量的玻璃器皿,所獲得的稀釋結果將會更為準確。如果每一個玻璃器皿都已經被分別校正過,同樣也會改善準確度。但是大型玻璃器皿會產生可能有危險性或者棄置費用昂貴的廢棄物。因此必須要在所需要的準確度大小,與將會產生多少量廢棄物之間作出選擇。

微量吸量管

要使用微量吸量管時,必須讓新的管尖緊緊地套在吸量管前端。

使用微量吸量管要避免的錯誤:

・使用製造商推薦的管尖品牌。其他管尖品牌可能無法達到適當的密封狀態。

・要先濕潤吸量管管尖, 而讓管尖內壁與蒸氣達成平衡狀態,在進行排放液體之前,要先吸取並排出液體三次。

・不需要擦拭管尖,以免造成樣品損失現象。 液體必須與吸量管處於相同溫度環境中。較冷的液體,會造成被排放出來的體積量少於標示的體積量,而較熱的液體,又會造成排放出來的體積量大於標示的體積量。當使用最小體積量時,誤差值會達到最大值。

・要在海平面氣壓環境中校正微量吸量管。 在較高海拔位置會造成校正失誤。當使用最小體積量時,誤差值會達到最大值。藉由秤量所排放出來的水質量,而來校正吸量管。

將管尖放置在包裝盒或者分配盒中,因此就不會讓手指汙染到管尖。可以利用吸量管頂部的球形旋鈕設定所需要的體積量。將活塞壓到第一階段,此時是對應到所選擇的體積量。要垂直拿著吸量管,再讓管尖浸入試劑溶液 3~5 mm,然後緩慢地釋放活塞以吸取液體。將管尖放在液體中數秒,讓液體被吸入管尖中直到完成吸取過程。將吸量管垂直地從液體中拿出來,而不可以讓管尖接觸到容器的內壁。管尖吸取液體的體積量,取決於拿取吸量管的角度,以及讓管尖在吸取液體期間有多深入液體表面等各項。為了排放液體,要讓管尖接觸到接收容器的內壁,並且輕輕地按下活塞直到第一個階段停止位置。要等待數秒而讓液 體沿著管尖流出,然後再進一步壓下活塞,而讓最後的液體被擠壓出來。在轉移分配液體之前,可以先用該管尖吸取溶液再拋棄之,如此重複三次,讓新的管尖預先濕潤以增加吸量管管尖和管體等兩者的濕度。沒有進行預先濕潤過程,吸量管排放出來的體積量會比標示體積量還要少了約 1.3%。

應該要拋棄吸量管管尖,或者使用洗瓶將管尖沖洗乾淨才能重新使用。具有過濾膜 (請參考圖 2-14b) 的管尖,就不可以再被清洗而重複使用。

上述提到之吸取 (吸入) 與排放液體的流程被稱為「前向模式」。將活塞壓到第一個階段停止位置,然後吸取液體。為了排出液體,卻要將活塞壓超過第一個階段停止位置。使用「反向模式」,先將活塞壓超過第一個階段停止位置,而吸取了過量的液體。為了排放出正確的體積量液體,將活塞壓到第一個階段停止位置即可,而不要再繼續壓下去。對於發泡液 (譬如,蛋白質或 者表面活性劑等各種溶液) 與黏液 (如糖漿) 等各種液體,緩慢操作活塞的反向模式,會有助於改善精密度。

而甲醇與己烷等揮發性液體,也比較適合使用反向模式來吸取液體。對揮發性液體而言,快速地吸取過程能夠減少蒸發現象。但是反向模式不應該被應用於不會發泡,也不具有黏性的水溶液,因為反向模式的排 放量會比預期體積量還多出約 2%。

在表 2-5 中列舉出製造商提供的微量吸量管之容許量。

一旦內部配件老舊之後,其精密度和準確度也就會下降一個數量級。 在某個研究工作中,在一個生物醫學實驗室使用了 54 支微量 吸量管,其中的 12 支的準確度和精密度都能小於 1%。而這 54 支中的 5 支其誤差值大於 10%。當在 4 家醫藥公司的 54 位品管技師使用著適當功能性的微量吸量管時,有 10 位人員其操作的準確度與精密度都小於 1%。有 6 位人員的不準確度大於 10%。 微量吸量管需要定期校正和維修 (清潔、封條更換,和潤滑),以 及操作者 (指人員) 的操作能力需要經過認證。如果微量吸量管的誤差超過容許量的平均時間長度 2 年,則每 2 個月就需要校正一次,才能在 95% 的可信度條件下,讓微量吸量管在實驗室的操作情況是符合規格規範的。可透過測量排放出來的水質量 (請參 考第 2-9 節),或使用市售比色法套件等來校正微量吸量管。

注射針

如圖 2-15 所顯示的微升型注射針,其體積量是從 1 到 500 μL,且具有接近 1% 的準確度和精密度。當使用注射針時, 要先吸入與拋棄該體積量液體數次,以沖洗玻璃內壁和去除針筒內的氣泡。不鏽鋼針頭會被強酸所侵蝕,所釋放出來的鐵會汙染強酸溶液。注射針會比微量吸量管更為可靠些,但是在操作和清潔注射針時需要更為小心。

準確度 (accuracy) 是單一數據與真值的接近程度。

精密度 (precision) 是代表著再現性。

圖 2-16 是一種可程式化雙注射針型稀釋器類型,它能夠自動排放出微升體積量液體,並且能夠利用兩支注射針,而讓兩種溶液混合出具有可再現性的混合液。

在圖 2-13 提出一個可行策略,亦即秤量出足夠數量的 CsCl,而 在其中含有 2.00 μg Cs 的適當倍數,再於容積量瓶中溶解之。 然後進行一系列稀釋過程而讓濃度值降低到 2.00 μg Cs/mL。譬如,可以配製出含有 1000 μg Cs/mL 的母溶液。這個溶液的濃度值比所需要的濃度值還多出 500 倍。如果先後進行 50 倍和 10 倍的兩次連續稀釋過程,就能夠獲得所需要的 500 倍稀釋結果。 要配製出一公升的母溶液,需要 (1000 μg Cs/mL) (1000 mL) =1.000 g Cs。Cs 的原子量為 132.91,而 CsCl 的式量為 168.36, 因此含有 1.000 g Cs 的 CsCl 質量為為了配製出含有 1 000 μg Cs/mL 的母溶液,要秤量 1.267 g CsCl (已經對空氣浮力進行校正),再將 CsCl 溶解在 1.000 L 的容積量瓶中。一般上,比起秤量剛好 1.267 g,更容易就秤量到接近所需要數值的質量 (譬如 1.284 g)。因為是 1.284 g,所以濃度值將會是 1 014 μg Cs/mL,而不是剛好 1 000 μg Cs/mL。

使用微量吸量管 (請參考圖 2-14) 可以轉移 1 到 1 000 μL (1 μL 的各種體積量。液體會被包含在拋棄式聚丙烯管尖中, 除了氯仿以外,對於大多數水溶液和很多種有機溶劑而言,管尖是具有安定性的。管尖也會被濃硝酸或濃硫酸所侵蝕。 如果要防止氣溶膠進入吸量管管身內,可以使用配備有聚乙烯濾膜的管尖。氣溶膠會腐蝕吸量管的機械配件,或者在生物實驗中造成交錯汙染現象。為了獲得最佳的準確度和精密度,應該使用吸量管製造商所推薦的管尖。

圖 2-11 (a) 移液吸量管和 (b) 測量型 (Mohr 型) 吸量管。[複製許可權來自於 A. H. Thomas Co., Thomas Scientific, Swedesboro, Philadelphia, PA。]
表 2-4 A 級移液吸量管的容許量
圖 2-12 具有三個閥門而能利用吸量管控制液體的吸取與排放的橡膠安全吸球。擠壓 A 閥門時, 能從安全吸球中擠出空 氣。然後擠壓 S 閥門, 讓接著安全吸球的一根吸量管吸入液體。接著擠壓 E 閥門,而從吸量管中排放出液體。[MARTYN F. CHILLMAID/SCIENCE PHOTO LIBRARY/ Science Source.]
圖 2-13 連續稀釋過程的例子。
圖 2-14 (a) 配備有一次 性塑膠管尖的微量吸量 管。(b) 含有聚乙烯濾膜 以避免氣溶膠汙染吸量管 管身的管尖放大圖示。 (c) 體積選擇旋鈕設定在 150 μL。[© 複製許可權 來 自 於 Rainin Instrument, LLC, Oakland, CA。]
表 2-5 製造商提供的微量吸量管之容許量
圖 2-15 Hamilton 公司生產的 1 μL 體積且在玻璃 針筒上有 0.01 μL 刻度的注射針。[複製許可權來自 於 Hamilton Company, Reno, NV。]
圖 2-16 Microlab 公司生產的 600 型雙注射針稀 釋器,這是可程式化而能夠由儀器前方的雙注射針排放出微升體積量液體的機型。這種機型能夠具有再現性地排放出單一種液體或兩種液體的混合液體。[複製許可權來自於 Hamilton Company, Reno, NV。]